九游会集团登录 - 官网

谈谈CAPS在卵白质转膜实行中的使用


CAPS是,全称3-(环己胺)-1-丙磺酸,一种无机化学物质,白色结晶粉末,CAS号1135-40-6,是一种生物缓冲剂,常用在生化诊断试剂盒、DNA/RNA提取试剂盒及PCR诊断试剂盒。用于酶化学及HPLC分散碱性药物的缓冲液,在卵白测序的转膜历程中使用普遍。CAPS缓冲液由CAPS、去离子水构成,调PH到11.0,用于纤连卵白的纯化。

操纵要点:
1、SDS-PAGE电泳:按惯例条件举行(CAPS体系:用于>=20KD卵白;Tris-Tricine体系:用于低分子量卵白,也可用于高分子量卵白);
2、甲醇浓度:CAPS电印迹缓冲液中甲醇浓度范畴是0-20%(甲醇浓度高,用于低分子量卵白转印;甲醇浓度低乃至不含甲醇的用于高分子量卵白的转印;
3、PVDF膜处置:取出PVDF膜,用甲醇浸泡数秒钟,然后放入CAPS电印迹缓冲液中。(注:今后的操纵须避免PVDF膜干枯。假如膜变干,须反复本步调的操纵);
4、凝胶处置:取出电泳凝胶,在CAPS缓冲液中浸泡5-10分钟。(注:转移某些强碱性卵白pI>9.0时,可省略本步调);
5、安置转印槽子:将滤纸和海绵放入电印迹缓冲液中浸泡一下,然后按海绵、滤纸、PVDF膜、凝胶、滤纸、海绵的序次将电印迹夹层装好,并放入小型电转槽中;
6、转印条件:在50V恒压条件下(100-170mA)于室温下举行电印迹转移,转移工夫为0.5-2小时。(注:务必排尽凝胶和PVDF膜之间的气泡。比方对70kD以上的卵白质须延伸转移工夫);
7、PVDF膜染色前处置:取出PVDF膜并用去离子水略为漂洗,用甲醇浸泡数秒钟,然落伍行染色;
8、膜染色:考马斯亮蓝染色(将0.1%考马斯亮蓝R-250溶于40%甲醇/1%乙酸中)30-50秒(切勿凌驾1分钟),50%甲醇脱色(勤换脱色液),用去离子水充实洗濯,然后晾干即可.

CAPS缓冲液配制:
1、10xCAPS(100mmol/L)缓冲液配制,办法如下:CAPS,22.13g;加去离子水到900ml;用2mol/L NaOH(约20ml)将pH值调到11.0,然后定容到1L,储存于4C。
2、CAPS电印迹缓冲液(含10%甲醇的1*CAPS)配制,办法如下:10xCAPS 200ml;参加甲醇200ml;参加去离子水1600ml即可。

其他使用:
CAPS照旧制造焊接质料、空调设置装备摆设和制造的质料;还用于制造烟火:用作剖析试剂、热互换载体,也用于制药产业;用于氛围调治、烟火、干电池;也用作助焊剂、枯燥剂;针对涂料行业,用于水性异氢酸酯固化剂。湖南九游会集团登录侍生物出售种种生物缓冲剂,包罗CAPS、TRIS、BICINE、MOPS等,纯度高>99%,工艺波动,接待列位详询。
曾经到最底了